細胞分離可以通過物理或者免疫磁珠的方法去除不感興趣的細胞，有助于目的細胞的富集并去除死細胞。密度梯度離心法是最常用的方法富集感興趣的細胞，原理是根據細胞在介質中的沉降系數進行分離，特定密度的細胞可以在密度梯度介質中被輕松分離。Serumwerk Bernburg是專門的生產商和服務商，為廣大科研和臨床工作者提供一系列碘化物的密度梯度分離液包括：即用型、多功能型分離液，產品符合GMP標準，具有安全無毒、低滲透性和分離純化效果好等特點。

多形核粒細胞(PMNs)，主要是中性粒細胞，同時包括少量嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞。Polymorphprep分離液的高滲透壓可使紅細胞失水而縮小，從而增大紅細胞的有效浮力密度，同時分離液中的葡蔗糖能促使紅細胞聚集并在溶液中快速沉降，隨著離心過程紅細胞會被逐漸沉降到底部，所以利用Polymorphprep分離液可以快速有效的同時獲得PMNs和PBMC細胞。

具體的實驗流程如下：

1、為了達到最好的效果，使用抗凝全血，如EDTA，肝素或檸檬酸。EDTA 抗凝效果最佳。

2、將5毫升血液+ 5毫升分離液放入15毫升試管中，下層是分離液上層是血液。

3、500-550g室溫離心30分鐘，離心速度緩升緩降，升2檔降2檔。

4、離心后，可以看到兩圈白膜層。上面PBMCs，下層是PMNs，小心吸取PMN。

5、為使PMNs恢復正常滲透壓，可以加入等體積的0.45% NaCl溶液或0.5體積正常濃度的培養基進行稀釋。

6 、將細胞懸浮液轉移到一個15ml的試管中，加入2ml PBS, 400 g離心10分鐘(18-22°C)，也可以被重懸在培養基中完成后續實驗。

注意事項：

1）該分離液僅適用于人的未作稀釋的血液，不適用于動物血液。

2）建議使用兩小時內的新鮮血液，待分離血液和待用分離液的溫度需要保持在18度-22度之間。

3）注意離心時間越長或離心力越大，會導致PMN進一步向紅細胞處遷移。

4）這里使用15ml離心管，推薦用5 ml血液+ 5 ml分離液進行密度梯度離心，若使用50ml離心管，建議使用 18 ml 血液+18 ml Polymorphprep?。

Serumwerk Bernburg成立于1954年，是一家現代化的生產商和服務商。2021年6月1日起，Serumwerk Bernburg AG公司從雅培診斷收購了密度梯度分離液產品線。并授權達科為是中國獨家代理商。分離液系列產品不僅可以分離多種種屬，如人、靈長類、嚙齒類、兔、反芻動物等來源的多種細胞、亞細胞器，還可以分離純化膜囊泡、病毒、蛋白質，核酸等物質。分離液產品生產、包裝、發布嚴格按照GMP和ISO13485標準執行。

公司網址：https://diagnostic.serumwerk.com/

達科為可以提供Serumwerk Bernburg AG的全系列分離液產品，產品信息如下圖所示：